DNase I比色制造制造技术

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小编:完整下载详细技术数据 [技术实施步骤摘要] 比色检测方法的专利DNase活性在分析化学领域中,并且基于DNA对照过氧化物酶活性的DNA酶I活性的具体参考比色检测方法MIL-53(Fe)的。 DNA酶

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[技术实施步骤摘要]
比色检测方法的专利DNase活性在分析化学领域中,并且基于DNA对照过氧化物酶活性的DNA酶I活性的具体参考比色检测方法MIL-53(Fe)的。
DNA酶I描述了能够水解在单链脱氧核苷酸或单链或双链的核酸内切酶寡脱氧核苷酸产生的单链或双链DNA的技术。
它广泛分布于哺乳动物的体液和组织中,尤其是垂体和胰腺。
除已知的胰腺消化外,DNase I在DNA修复,基因重组和细胞凋亡中起重要作用。
DNA酶I的缺乏或减少是人类全身性红斑狼疮,但可引起胃癌和结肠癌,DNA酶I的乳腺癌患者和糖尿病患者的血清的活性高于正??常。
此外,DNase I已被用作心血管疾病的诊断标志物,例如急性心肌梗塞和短暂性心肌缺血。
因此,DNA酶I活性分析,它是不可缺少的开发灵敏度高,选择性好,为临床诊断和药物筛选的分析。
用于检测DNA酶I活性,酶联免疫吸附测定,微芯片电泳,电化学测定法,荧光测定法,等比色测定的传统方法。
其中,比色法,操作成本高是简单,还有一个优点,即可以在视觉上观察到的,检测DNA酶I的一个重要方法。
有机金属骨架(MOF)是由一组离子或过渡金属的多官能有机配体的结合形成的相对较新的多孔结晶材料。
MIL?53,MIL?88,MIL?101铁基MOF喜欢指示过氧化物酶的催化活性,H 2 O 2,抗坏血酸,已成功地应用到比色生物传感器设计,如葡萄糖有报道。平均
自米尔金和Alivisatos组创建,与DNA,指向性组纳米结构,生物传感器,例如药物施用的,相关联的杂化材料已被广泛报道的各种应用。
DNA是一种优秀的生物聚合物,在生物纳米技术中被广泛采用。由于其高度可编程的特征,其与靶标的特异性键合或切割,其结构转化能力以及其在生物界面上的独特相互作用。
研究发现,其具有与所述额外的稳定性和分子间力或分子识别可促进MOF组合MOF之间的共价键的核酸。
寡核苷酸?MOF复合物用作荧光探针以获得针对H5N1的抗体,并且已经报道了DNA和Hg2 +的检测。
陈报道了电荷刺激反应介质(荧光探针或抗癌剂),以使用金属官能化核酸骨架(NMOF)有机纳米尺寸。
菊是含有DNA铁卟啉,所述MOF功能,包括的AuNP和链霉(SA),被开发作为探针来检测的Pb 2+和DNA的实时性。
然而,很少有人报道使用DNA来调节MIL-53(Fe)内源性过氧化物酶特性的研究。
纳米界面的寡核苷酸酶 - 通过促进底物亲和力已报道的研究显著提高纳米酶的内在酶活性,并研究了DNA的存在是通过物理干扰或酶它抑制酶的活性。静电排斥
通过这些报告,我们不断的研究兴趣,这项专利技术MIL-53(E)的过氧化物酶活性有效地与不同长度的长基地单链DNA(单链DNA)的启发我发现它可以调整。虽然链具有更强的促进作用,但具有较少碱基的短ssDNA不能有效地影响MIL-53(Fe)的过氧化物酶活性。
不同长度的ssDNA提供不同的酶 - 底物亲和力。根据这个特性,长链DNA酶I有效的ssDNA的ssDNA的特性被水解成短链结合,我们开发了一种简单而可靠的比色传感器,用于检测DNA酶I的活性
据我们所知,这项研究是利用单链DNA的调整MIL-53(FE)的过氧化物酶活性,以确定DNA酶I的一个罕见的例子。
它的性能,便捷的DNA酶I快速,灵敏度高,因此符合要求的具体检测,你可以在不久的将来,临床应用有很大的潜在价值。
在技??术上实现专利技术的目的,脱氧核糖核酸酶的活性的比色检测的方法I(DNA酶I)调节MIL-53(FE)的DNA,即是提供一种基于DNA的比色检测方法。过氧化物酶53(Fe)是一种比色法,用于简单,经济,有效和快速检测DNase I活性。
该方法是基于在ssDNA的不同长度的上的DNA酶I的效果为长链的ssDNA短链的单链DNA中的高效水解活性,和模仿酶MIL-53(Fe)的效果的差别。TMB比色底物构建了实用且有效的比色检测方案。
为了实现先前的专利的目的,专利技术采用如下技术方案:?基于DNA调节剂的过氧化物酶活性的MIL 53(Fe)的比色检测法DNA酶I的活性。以下步骤:?(1)中并用的FeCl 3·6H 2 O作为反应原料便宜对苯二甲酸合成金属金属结构材料MIL 53(Fe)的?
334克对苯二甲酸和0。
所述的FeCl 3·6H 2 O在545克溶解在10ml DMF中,将混合物搅拌,在室温下10分钟。
将所得溶液转移到50ml涂有聚四氟乙烯的不锈钢高压釜中,然后密封并置于150℃的烘箱中17小时。(2)步骤(1)的产物。冷却至室温后,通过以6000rpm离心3分钟收集黄色,造粒并用去离子水彻底冲洗以除去过量的试剂。
将产物在60℃下真空干燥24小时。
最后,得到黄色产物MIL?53(Fe)。
(3)将步骤(2)中得到的MIL 53(Fe)在水溶液中配混,并在使用前混合在振荡器中。
(4)将ssDNA置于1×DNase I反应缓冲液(10mM Tris 2 HCl,2)中。
5mM MgCl 2,0。
5mM CaCl 2,pH 7。
6),在95℃加热5分钟后,将其缓慢冷却至室温。
接下来,将不同浓度的DNase I添加到先前的溶液中并使其在37℃下反应2小时。
(5)接下来,将步骤(3)中制备的MIL≤53(Fe)加入到步骤(4)的系统中。
然后浓度为10mM,pH4。
作为缓冲溶液,加入溶解在乙醇中的TMB,加入NaOAc→HAc作为反应底物,然后加入H 2 O 2引发反应。
(6)步骤(5)该系统在40℃下样品的下反应40分钟进行离心从MIL的混合物中取出?53(Fe)的,将上清液通过UV分析检测到?可见DNA酶I总吸收。有效信号
材料MIL≤53(Fe)的MOF中的步骤(1)的尺寸为约1-3μm。
步骤(4)中加入的ssDNA浓度为200nM。
步骤(5)中加入的MIL-53(Fe)的终浓度为5μgmL-1。
加入NaOAc?步骤(5)的醋酸溶液是通过在pH为4的醋酸钠?醋酸溶液?9混合的NaOAc和醋酸来制备,优选的是pH为4。
0
将步骤(5)溶解在乙醇中,并以0TMB的浓度加入。
2毫升。
在步骤(5)中,以2的浓度添加H 2 O 2。
5 mM。
步骤(6)中待测试的DNase I的检测浓度范围为0。
2 - 7 UmL - 1(R2 = 0。
997),检测限为0。
09UmL?1。
更具体地,过氧化物酶的比色检测方法基于根据本专利的DNA调制器的活动MIL 53(Fe)的DNA酶I的活性,包括以下步骤:?(1)0。
334克对苯二甲酸和0。
将作为反应起始原料的545g FeCl 3·6H 2 O溶解在10ml DMF中并在室温下搅拌10分钟。将所得溶液转移到50ml聚四氟乙烯中的不锈钢高压釜中,然后密封并置于150℃的烘箱中17小时。
(2)步骤(1)的产物。冷却至室温后,通过以6000rpm离心3分钟收集黄色,沉淀并用去离子水彻底冲洗以除去过量的试剂。将产物干燥。在60℃下在真空中24小时。
最后,得到黄色产物MIL?53(Fe)。
(3)将步骤(2)中得到的MIL 53(Fe)在水溶液中配混,并在使用前混合在振荡器中。
(4)此外ssDNA的200nM的对PCR管200微升,LifeECOPCR设备(骏,杭州)加热5分钟,在95℃时,缓慢地冷却至室温。
因此,在1×D中,该文件来自Techno。
【技术保护点】
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一种比色检测DNase I活性的方法,包括以下步骤。(1)使用对苯二甲酸和FeCl 3·6H 2 O作为反应原料合成MIL金属的有机结构材料。
53(信仰):首先,它将是0。
334克对苯二甲酸和0。
所述的FeCl 3·6H 2545克O溶于10毫升DMF,并将该混合物搅拌,在室温下10分钟,并且将得到的溶液转移到在聚四氟乙烯涂层50毫升的不锈钢高压釜中,然后密封我做到了。将其置于150℃的烘箱中17小时。(2)将步骤(1)的产物冷却至室温后,通过在6000rpm下离心3分钟收集黄色沉淀物,并用去离子水冲洗以除去过量的试剂。将产物置于60℃。真空干燥24小时,最后得到黄色产物MIL。
53(信仰)。(3)步骤(2)中获得的MIL?
53(Fe)与零浓度复合。
准备使用1mg / ml的水溶液并在每次使用前在搅拌器中混合。(4)将ssDNA置于1×DNase I反应缓冲液(10mM Tris?)中。
HCl,2。
5mM MgCl 2,0。
5mM CaCl 2,pH 7。
6)在95℃下加热5分钟后,缓慢冷却至室温,然后前溶液中加入DNA酶I不同浓度,并使其在37℃反应2小时..(5)接下来,在步骤(3)中准备MIL
将53(Fe)加入到步骤(4)的系统中,然后浓度为10mM,pH为4。
从0到NaOAc?
使用HAc作为缓冲溶液,加入溶解在乙醇中的TMB作为反应底物,然后加入H 2 O 2以引发反应。(6)在(5)的系统在40℃下反应40分钟后,将样品离心以从混合物中除去MIL。
检测上清液UV 53(Fe)?
Vis的吸收信号完成了DNase I活性的分析。
[技术特征摘要]
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比色检测方法,包括以下步骤DNA酶I活性的:(1)合成使用对苯二甲酸和的FeCl 3·6H 2 O作为反应原料的金属有机MIL结构材料53(Fe)的?
334克对苯二甲酸和0。所述的FeCl 3·6H 2545克O溶于10毫升DMF,并将该混合物搅拌,在室温下10分钟,并且将得到的溶液转移到在聚四氟乙烯涂层50毫升的不锈钢高压釜中,然后密封我做到了。将其置于150℃的烘箱中17小时。(2)将步骤(1)的产物冷却至室温后,通过在6000rpm下离心3分钟收集黄色沉淀物,并用去离子水冲洗以除去过量的试剂。将其真空干燥24小时,最后得到黄色产物。制备MIL-53(Fe),(3)在步骤(2)中获得的MIL-53(Fe)。它的浓度为0。
使用1mg / ml水溶液并在每次使用前在振荡器中混合。(4)将ssDNA置于1×DNase I反应缓冲液(10mM Tris-HCl,2)中。
5mM MgCl 2,0。
5mM CaCl 2,pH 7。
6)在95℃下加热5分钟后,缓慢冷却至室温,然后前溶液中加入DNA酶I不同浓度,并使其在37℃反应2小时..(5),然后加入步骤(3)MIL?53(Fe)的步骤(4)制备的系统中,然后加入浓度为10毫米,由pH为4的。
使用的NaOAc?醋酸缓冲剂,TMB溶液中加入溶解于乙醇作为反应底物,然后将反应物通过加入H 2 O 2开始。(6)进行了阶段。[专利技术特点]
研发技术人员:宋伟,丁伟,姚伟,姚成,
申请(专利):南京工业大学
类型:发明
国家地区和城市:江苏省,32
请下载完整详细的技术信息。我是这项专利的所有者。

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